奥林巴斯显微镜成像,曝光和色彩平衡错误的故障排除

2019-06-12 18:48:25 53

曝光和色彩平衡错误是可能发生的彩色显微摄影和显微镜,业余和专业都已经遇到的最常见的问题。 一般,源的错误是显而易见的,或可以容易地确定通过折回的步骤导致的显微照片曝光。

其他类似的错误,如倒易律失效,冷凝器畸变,和意想不到的颜色变化不太明显,往往采取一些广泛的故障排除,以揭开源。 缺乏适当的色温之间的平衡显微镜光源和膜乳液是意想不到的颜色变化在显微摄影中的最常见的原因之一。 如果光源的色温太低,膜,显微照片将有一个整体的淡黄色或偏红,会出现  另一方面,当光源的色温过高的膜,显微照片将有偏蓝,会出现凉爽  错配的程度,将决定这些颜色的变化程度,具有很大的差异,导致极端的颜色变化。

图1给出了一个乘法染色薄款的苜蓿植物组织,已经感染了冠疣菌,Physoderma alfalfae,显示几种常见的曝光和色彩平衡错误的显微照片。 曝光不足和曝光过度,两个错误屡有发生,左手部分深色和浅色领域中的显微照片图1所示。 中央右侧部分的显微照片,显示一个共同的颜色转变的原因有多种,可以发生。 表示的带蓝色和黄色区域的薄膜,这是由于色温不当的使用所产生的任一钨膜与钨光源的的日光光源或日光胶片的色彩平衡错误。 这些以及其他类似的错误,如使用太沉重染色或太厚的标本,代表最常见的错误,所面临的一个在常规的显微镜显微照相。 以下各段处理特定错误和故障的曝光和色彩平衡的显微照片和现在建议的补救措施。

色彩平衡错误 -测试适当的平衡显微镜照明,电影的乳液设计相匹配,是有明确的背景下的显微照片出现白色。 一个蓝色的背景表示色温过高,而黄色的背景标志着色温太低。 这个概念被彻底讨论的色温部分的奥林巴斯显微镜资源中心显微镜底漆 

使用薄膜还没有被正确平衡光源的色温在显微摄影,可导致不寻常的色彩变化,造成不自然的色调,没有忠实地再现,在显微镜目镜看到的颜色。 图2中的显微照片表明胶片乳剂和显微镜照明光源的色彩平衡之间的过滤器的正确使用方法。 的中心(图2(b))是感染苹果黑星病, 苹果黑星病菌真菌引起的一个破坏性的疾病的苹果树苹果树干薄款的显微照片。

标本染色植物组织设计的四倍混合物并拍下使用3200 K钨卤光源64T FUJICHROME,钨均衡的透明度(转回或幻灯片)膜。 在左侧(图2(a))是相同的视场拍摄使用FUJICHROME Velvia的,日光平衡的膜,但具有相同的3200 K的钨卤灯。 需要注意的是所有色相转移到较长的波长和整体形象有一定的偏黄。 在右侧的显微照片(图2(c)),用相同的显微镜,但使用日光平衡的闪光管为光源,FUJICHROME 64T透明膜的。 在这些条件下,图像有一个整体的蓝色的演员,显得很“酷”。 适当的薄膜选择图2(a)会是FUJICHROME 64T(钨均衡)和图2(c),这将是Velvia的FUJICHROME(日光平衡)。

大多数显微镜都配备了产率,色温度为3200K(匹配室内B型膜的色彩平衡),但不适合日光平衡膜的高色温下,可以设置为钨卤灯。 为了生产光模拟日光品质, 过滤器必须被放置在光路中的颜色转换  最常见的转换过滤器(生产大增量色温),是柯达,奥林巴斯显微镜,光转换从3200 K至5500 K。80A滤波器,相当于日光平衡滤波器被称为的LBD过滤,尼康显微镜过滤器被称为的NCB过滤。 请务必使用一个过滤器进行显微摄影时平衡日光下钨的电影(3200 K)照明。 其它过滤器可用于降低色温或小的增量变化,在我们的讨论中审查的影响显微摄影色温 

小于调整色温是由“微调”的过滤器,通常被称为颜色补偿色彩平衡滤波器的,产生的增量变化为100 K 600 K的色温。 各种过滤器是市售协助photomicrographer的光学和照明问题,以获得最高质量的图像补偿。许多显微摄影的颜色变化或管进入光通路插入适当的柯达雷登的色彩补偿滤镜是可以治愈的。 显微摄影中常用的其它过滤器,如中性密度,对比度增强,紫外线吸收,热吸收,红外,和过滤器的设计,以协助加强信息揭示的生物污渍。 这些过滤器可能需要补偿,以避免生产彩色显微照片中的颜色变化。

临界显微摄影决定了颜色补偿滤波器的颜色变化,这可能会发生变化的6原色:红,绿,蓝色,青色,品红色,和黄色的中任一项的用于小心控制。 大多数情况下,电影批次的变化是第一个明显的新的显微观测时的背景颜色。 这种颜色应该是一个中性的白色,和颜色的变化发生时,他们通常是非常明显的。 这是一个简单的事情,与颜色补偿过滤器,通过使用一个过滤器的互补色移的背景本校正色彩偏移。 当进行显微摄影沉重的负荷,使用彩色胶片,这是明智的购买薄膜具有相同的乳液每卷数量和储存在冰箱或冰柜中多余的。 然后,可以使用一个测试辊,以确定的彩色平衡变量,应保持不变的其余部分的膜批次。 推荐的程序是没有补偿滤波器,其次通过每个的柯达雷登CC10系列过滤器(CC10R(红色),CC10G(绿色),CC10B(蓝色),CC10C(青色),CC10M的帧暴露暴露一个单一的框架(品红色),和CC10Y(黄色))。 对齐后在5000 K光表所有七个显微照片显示了干净的白色或非常浅的灰色背景,背景是一个已经被正确过滤。 这个概念更详细的讨论,在我们的部分过滤器的彩色显微摄影 

在图3所示的显微照片显示色彩校正使用彩色薄款李子树茎组织感染黑色结,,由真菌Apiosporina morbosa(也称为为Dibotryon morbosum)引起的一种破坏性疾病的梅树的转移。 图3(b)所示的图像时,适当地校正的色偏或轮班。 在左边的显微照片(图3(a))受到一个蓝色的演员,这可能是由于轻微的色差温度的不平衡。 进入显微镜的光路中插入一个柯达:雷登CC20Y(黄色)滤波器,在图3(a)所示的颜色从转移类似于在图3(b)的显微照片。 同样的显微照片,图3(c)中,有一个明确的,一个CC10M CC10B补偿滤波器组的结合使用可以得到纠正,带绿色偏色。

在许多情况下,低密度的颜色补偿过滤器可以有效地使用各种染料被污染的组织超薄切片,以提高颜色再现性。 每个试样必须尝试和错误的基础上评估的,因为过度使用颜色补偿滤波器可导致降解互补的污垢的颜色,可能会呈现一种色调的背景与。 它通常是可取的,限制试图使用它们,以提高染色的颜色时,色彩补偿滤镜密度低于CC20。

生物组织的薄切片也常常与一种或多种有机染料染色,有选择性地增强存在于试样中的各种功能的可见性。很好的强度和色调所产生的大多数生物组织污渍将重现彩色胶片上,但往往会出现一些污渍冲了出来,或有他们的颜色,尤其是在多个染色混合物转移。 在许多情况下,颜色补偿过滤器可以帮助恢复大部分或全部失去的颜色,但太多的过滤可以影响邻近的染色特性的颜色和背景。 这个问题发生与流行的污渍曙红,品红和亚甲基蓝,这是不是很好的再现大多数彩色胶片。 通常情况下,这些染料染色的组织,无论是单独使用或在混合物中,出现浑浊和色彩饱和度的缺乏。

为了抵消这种效果,显微镜使用一个的镨钕过滤器 ,其中包含稀土元素溶解在玻璃的组合。 钕镨混合物过滤器除去部分的橙色,棕色,蓝色和红色染色的功能,在试样的色彩饱和度强度增加的效果,即在可见光光谱区域。 消光系数最高的是580和590纳米之间的镨钕过滤器,使过滤器除去大部分的橙色和黄色的颜色,往往暗红色和蓝******调的彩色薄切片。

图4(b)给出人结肠上皮组织染色,曙红和苏木精的混合物,和用钕镨插入显微镜光路中的过滤器拍摄的图像。 注意在此显微红色和蓝色的色调相比,对于同一试样没有镨钕过滤器(图4(a)),其中有一个整体偏黄的色彩饱和度的急剧增加。 尝试使用色彩补偿滤镜校正图像一个:CC10B(蓝色)和CC10M(洋红色)相结合的色彩补偿滤镜是用来去除多(但不是全部)的黄******调,在图4(c)所示试样。 虽然色彩校正显微照片如图4(C)接近的质量,生产镨钕过滤器(图4(b)条),它仍然有轻微的偏黄,缺乏专门的过滤器与丰富的色彩质量​​。

在某些情况下,可以成为背景的生物试样浅色染色过程期间,不希望的伪影。 为了避免这种情况,颜色补偿过滤器可以用于以减去背景颜色,只要它是不是过于饱和。 薄切片染色的另一个问题是着色的安装介质 制备薄切片,加拿大香脂,大众媒体通常会转浅黄色,随着年龄的增长,或整装标本。 一个蓝色的色彩补偿滤镜(CC10-20B)通常会克服这个问题,样本,除非是一本很厚的整体安装。 在这种情况下,它可能是不可能完全中和黄色的色调。

显微镜钨灯不发出显着的紫外线的光量,但一些新的卤钨灯,除了汞和氙气灯,产生相当量在300-400纳米范围内的紫外线。 紫外线照射,可暴露在许多彩色胶片的感蓝乳剂层,导致整体的显微照片,有一个蓝色的演员。 这主要是荧光显微镜的问题,但它可以发生在任何显微镜使用高强度的钨 - 卤素,汞,或氙气灯。 为减少紫外线光,使用柯达雷登的2B2E吸收紫外线辐射的过滤器,在390和415纳米以下,分别为。 2B滤波器去除基本上所有的紫外线的波长,只留下可见光照亮标本。 2E过滤器有更广泛的波长阻塞,也将删除一些紫色和蓝色光波长较短,使得该过滤器不太理想的彩色显微摄影。

图5中所示的紫外线光的影响,彩色显微摄影。 在照片的左(图5(a))示出了伊红 - 苏木精染色薄膜部的神经细胞中的人髓质。 有一个整体偏蓝洋红色的显微照片,弥漫着最标本的特点和背景。 将柯达雷登2B滤波器和CC10G的补偿过滤器组合成显微镜光路后,中央的图像(图5(b))。 请注意,这个显微演示更好的色彩饱和度和更清洁的背景消除偏蓝。 试图纠正单独色彩的色调误差与CC20Y(黄色)颜色补偿滤波器,在图5(c)所示。 注意背景仍然有一个由过滤器不能完全除去的反感偏蓝。

近90%的钨或钨 - 卤灯所发出的辐射发生的形式,产生热量,这是与红外波长。 吸热过滤器,以补偿该工件,可以添加到显微镜的光路中,靠近所述照射器,以除去不需要的红外线的波长和保护显微镜的光学元件,过滤器,和试样不受热损伤。 某些吸热的过滤器是由一种特殊类型的派热克斯耐热玻璃称为为Aklo,该吸收红外线的热射线,绿色或蓝绿色的颜色。 与Aklo的过滤器可能会引入到显微照片的色彩平衡偏差。 可以得到纠正这种不良的副作用与颜色补偿过滤器的吸热的过滤器的颜色是互补的。 如果从灯壳体,热过滤器可以去除,这样做并检查它在5500■轻型表。 浅绿色热过滤器可以补偿由CC10M或CC20M的洋红******彩补偿滤镜,蓝绿色高温过滤器,可以补偿由淡红色(CC10R或CC20R)滤波器。 将互补的过滤器热过滤器的顶部,直到其中一个发现,正好平衡带有热过滤器上的颜色变为中性。 当插入显微镜光路,这种补偿滤波器应减轻色彩平衡问题。 一些较新的显微镜放回灯箱设计,以反映热的分色干扰滤波器。 分色滤光器中,能够更有效地阻挡热量比石英或玻璃吸热过滤器,而不会出现裂纹或断裂时,显着量的热被吸收。 他们也不太容易引起不必要的彩色显微照片中的颜色变化。

冷凝器色差 -颜色平衡可能会出现错误使用阿贝消球差台下冷凝器,这两者都缺乏校正色差时,在显微摄影。 即使在显微镜已正确配置科勒照明和冷凝器和现场光圈隔膜有正确的光圈大小和位置,图像会出现蓝色或红色的视场光阑叶片边缘附近的重点。 这的神器是由于色差,会影响整体的形象和色彩平衡上的显微照片,有显着的影响。 稍微向上或向下移动显微镜焦点将导致附近的视场光阑叶片被翻译作为冷凝器转移至红黄色变为蓝色的颜色过渡。 色差色偏文物,可以通过适当的过滤成功删除,但不可能完全消除任何机制改进聚光光学校正像差错误。 铭记这一点,谨慎行事时,进行阿贝和齐明冷凝器的彩色显微摄影。

通过仔细选择冷凝器的位置,产生了轻微的红色边缘,只是里面的形象视场光阑叶片和相应的蓝色外刀片定位密切边缘像差的影响可以最小化。 虽然这不会消除神器,这将有助于弥补每种颜色移位,并产生一个较为中性的色彩平衡的显微照片,甚至可以进一步改善色彩补偿滤镜。 阿贝或齐明冷凝器是一致的定位,重要的是确保这些冷凝器的显微照片中再现的色彩质量​​。

图6给出了一系列的彩色叶薄款阿贝聚光叠加在视场光阑的显微照片。 在左边的显微照片(图图6(a))示出的位置,以产生一个红色的边缘附近的视场光阑叶片,冷凝器的显微照片的中心(图6(b))所示的位置与叶片附近的蓝色的条纹。 在右侧(图图6(c)),红色条纹出现的视场光阑叶片和蓝色的条纹的另一一侧上。 这发生在冷凝器或灯丝与光轴位置,是一个很好的测试显微镜对准。

具有较高程度的光学校正(平场消色差和消色差消球差)的冷凝器推荐高品质的彩色显微摄影。 然而,当它是需要使用低级校正冷凝器,小心地保持的的显微摄影会话和使用颜色补偿过滤器,以减少造成色差的颜色工件在相同的位置在整个冷凝器的孔径光阑的开口的大小和高度。

互惠失败的错误 -大多数彩色胶片乳液,旨在短时间暴露在光线下,通常范围从1/500秒和1/2秒的间隔时间。 在光学显微镜中,特别是当改变光过滤器,偏振器,棱镜,添加在许多的对比度增强模式(相衬,微分干涉对比,霍夫曼调制对比度等)的光学路径中,正确的曝光往往较长超过1/2秒。 这部电影的互惠关系不再成立,而电影需要额外的曝光时间来得到正确的曝光。

这种现象被称为互易律失效,它发生在所有的彩色和黑白照相乳剂的成膜速度快,染料的组合物,或卤化银浓度无关。 “失败”只是表明曝光时间和光强度之间的线性关系不再成立,并不表示电影乳液在性能方面的失败。 显微镜的照明水平的变化在膜反应有时也被称为长曝光效果短曝光效果  在低光照条件下(典型的在高放大倍率的荧光显微镜和偏光显微镜),曝光时间必须经常被扩展到显着的胶片速度损失点。 极短的曝光产生同样的效果。 大多数膜也显示已曝光的卤化银晶粒,形成更小的潜像的中心,和一个较低的发展速度极其短的曝光时间在潜像中心的散射增加。

薄膜制造商的数据表和特性曲线表明多少需要额外时间以进行适当曝光。 每个单独的膜乳液具有调谐到特定范围的照度值,其中外面的膜的反应遭到破坏,而在倒易律不再持有的响应。 互易律失效,通常可以简单地通过黑白胶片的曝光时间或处理条件的增加补偿,但是这并不总是与彩色负性和透明度薄膜的情况下。 大多数彩色胶片有三种颜色敏感的染料层,其中每一个有一个稍微不同的特性曲线的位置和斜率在不同的反应中得到的互易效应可能造成不希望的颜色的变化或管型。 通常情况下,暴露时间和色彩平衡过滤器使用彩色胶片时,必须进行调整,以补偿很长或短的风险。

显微摄影,很长的曝光时间,经常发生由于低的照度水平,结果与对比度增强技术如荧光偏振光,如上所述。 实际上,超过5分钟的曝光时间并不少见,通常导致倒易律失效。 当使用黑白胶片,计算曝光值可以导致缺乏阴影细节的底片,但冗长的曝光补偿往往产生太多的高光区域中的密度,从而增加整体对比度。 这是由于这样的事实,互易律失效的效果大于试样照明的区域中是非常低的,可以克服的一个问题,即通过增加胶片显影的时间量。

在图7中,示出了一系列的连续曝光4分钟(图图7(a)),0.25秒(图7(b)),和0.04秒的互易律失效颜色透明度的显微照片中的效果(图7(c ))。 该标本染色,曙红,苏木精和成像FUJICHROME 64T钨平衡的膜,通过柯达E6协议处理的薄边的人类睾丸肉瘤。 在很长的曝光时间(使用中性密度过滤器,以减少照明强度),在图7(a)的显微照片是黑暗的,缺乏阴影细节,典型的互易律失效暴露几分钟的薄膜上。 在色彩搭配上蓝******调被抑制也有一个明显的转变。 通过减小曝光时间(或去除的中性密度过滤器),在图7(b)的显微照片,它显示了良好的曝光的结果,精确的色彩重现的锋利的试片​​细节。 在很短的曝光时间(图图7(c)),再倒易律失效的发生是由于曝光不足,显微照片是黑暗的,缺乏阴影细节。

中性密度​​过滤器,通常可以使用与成功的调制很短的曝光时间,以避免互易律失效。 然而,护理时应使用中性密度滤光片的彩色显微摄影曝光时间调整。 年龄较大的中性密度过滤器可能会取得其随着年龄的微黄色调,一些便宜的过滤器,也有某种程度的背景颜色。 如果中性密度滤光片的引入到不正确的色彩平衡已被仔细校准显微镜(参见图图3(a))的光学路径的查询结果中,使用颜色补偿过滤器,以返回到它的适当的平衡,在显微镜的照明。 此光学因素,如内部散射和反射,可能会影响中性密度滤光片的有效密度,导致它们从测得的密度变化。 出于这个原因,重要的是要校正的关键显微摄影的中性密度滤光片。

有很多种其他因素影响显微摄影时,使用颜色的透明度和负片色彩平衡。 颜色响应受制造胶片感光特性的变化,如厚度,ISO值和色彩保真度。 乳剂厚度波动是罕见的,但他们确实发生了,可能会影响在显微照片的色彩平衡。 膜制造商允许的变化程度通常是小于的柯达雷登CC10补偿滤波器的效果,使这些过滤器可使用的乳化剂和ISO变化的校正。 由于乳液的波动可以不同的六种颜色(红色,绿色,蓝色,青色,品红色,和黄色)中的任何一个,这是一个好主意,有这些过滤器的一组完整的手头。

彩色胶片可以储存条件不当也会影响色彩平衡,有时是无法纠正的色彩补偿滤镜或改变曝光时间点。 这是通常的情况下,膜已被破坏时,通过长时间的高温和/或高湿度,如条件时经常发生的彩色胶片实验室的货架上存放很长时间。 彩色胶片比黑白胶片温度和湿度的损坏更敏感,因为每个三色感光乳剂层,在这些条件下将有不同的反应。 胶片存放不当的影响是不可预知的,可能表现出来的色彩平衡,成膜速度快,或图像的对比度的变化。 前和暴露后,在冰箱中存储电影,它始终是一个好主意,特别是如果电影不能立即被处理。

有害化学品的膜,或过量的光的曝光,因此也有有害的影响的显微照片,这可能是困难的,如果不是不可能的,以纠正。 电影不应该被存放​​在通风橱或其他地方可能会受到攻击挥发性液体和气体,如甲醛,丙酮或******。 任何特定的化学物质可能对一个给定的胶片感光乳剂的影响是不可预知的。 电影速度可以增加或减少,可以显着影响的色彩平衡和对比度通常会丢失。 另一个实验室的危险,尤其是在生物化学,分子生物学,医学实验室,是无意中暴露膜高强度的辐射来源。 这些源包括钴-60同位素,镭,和X-射线,通常用在医院和一些研究实验室。 在机场的行李扫描仪还提供了一个辐射危害。 为了避免曝光的电影有潜在危害的辐射来源,不存储电影的地方正在使用辐射或放射性化学品被安置。 保护膜(既暴露和未曝光),无论是铅或混凝土屏蔽,在适当的情况下,将存储薄膜尽快进入流通领域。

膜乳剂的特性随时间变化的,所以大多数薄膜加盖在制造过程中的过期日期。 如果适当地保存在冰箱或冰柜,膜的寿命可以大大增加。 电影应该被放置在密封的容器(锁定保鲜袋或不透气的塑料容器就足够了),小心存放于低流量区域的冰柜或冰箱,直到它准备要暴露。 膜从冷库中取出后,总是让电影前几个小时开放的存储容器,以避免受潮损坏,平衡至室温。 如果妥善保存,膜往往会远远超出了建议的截止日期延长期间好。

显微照片很暗或冲了出去 -曝光的错误可能会导致的显微接收光照不足或太多造成,要么很暗或冲了出去,缺乏标本高亮细节的图像。 的试样的平均亮度,视各不相同,通常感兴趣的区域是不具有代表性的平均场亮度。 作为一个例子,在暗视野显微镜标本是明亮的光在黑暗的背景上,影像将被过度曝光,如果不计算曝光补偿测光表读数。 由此产生的显微照片,呈现明亮的标本冲了出去,缺乏细节。 这个错误可以得到补偿所使用的现场仪表直接放在明亮的标本来衡量增加了相机的胶片速度指标,以减少曝光时间,曝光时间,或(如果点测光不可用)。 胶片曝光详尽地讨论在另一部分的奥林巴斯显微镜资源中心显微镜底漆 

图8显示了一系列的显微照片,示出最常见的曝光胶片的颜色透明与发生的错误。 试样是一个60X的目标与校正领干玉米(玉米或玉米)组织拍摄的彩色薄款。 适当的照明所示由中央的图中的图像(图8(b))。 图8(a)表示棉铃虫当薄膜没有收到足够的光线适当地暴露乳液,和曝光不足的错误发生在非常暗的图像所导致的薄膜部。 曝光不足膜会留下阴影区域太暗,缺乏细节和高光区的通常呈现深浅不一的黄色和灰色。 彩色透明胶片曝光误差也不是很宽容的,只会产生可接受的结果,在一个半到一个正确的曝光F-停止。 通常在显微镜,平均标本亮度可能不会在整个视场是均匀的,并可能被包围在明亮的背景中出现的细节,小暗的功能。 这带来的问题时,使用相机的自动曝光功能,平均超过30-100%的视场面积测量曝光。 这些均可能导致曝光不足的标本有非常明亮的背景。 使用点测光(如果有的话),以缓解这一问题,或者如果电表平均视场较大部分,调整胶片速度设置,以提高曝光。 使用手动相机,增加曝光时间,或减少胶片速度调整,增加曝光。 F-STOP增量三分之一校准包围曝光的新标本和电影,它始终是一个好主意。 中包括的中位数为每个支架的每一侧上的至少两个或三个曝光,并保持这样的暴露试验的准确记录,以备将来参考。

(三)在图8中的图像出现非常薄的洗涤,由于膜的曝光过度。 过度曝光影响较轻的部分的电影,遭受显著或图像细节的损失总额。 发生此错误的原因是电影接收太多的光线,通常是由于快门速度太长或过量的光照强度。 卤钨灯(12伏,50 - 或100瓦),应调整到最佳显微摄影色温和照度之间的设置为8.5伏和9.0伏。 如果整卷被过度曝光时,故障可能是相机系统上的曝光设置。 观察相机的ISO指标,看它是否符合电影的速度,并检查,看是否正确设置快门速度。 自动摄像系统可以过度曝光的膜如果太长照明量的最低设置的快门速度。 中性密度​​滤光片,减少照明强度和执行测试括号曝光设置拨号时使用新的标本或电影。

另一种常见的风险可能会出现问题自动摄影机深深的颜色时,过滤器是用来控制对比度黑白显微摄影。 整个可见光光谱光电池或光电二极管在这样的相机可能无法以统一的方式回应,并产生不正确的曝光计算,导致显微照片是不是太亮或太暗。 曝光校正的过滤器,使用预定的过滤器的因素,讨论了在胶片曝光部分。 始终保持正确的曝光,以确保高质量的显微照片的彩色滤光片的曝光信息的准确记录。 自动相机光电二极管也可能是敏感的极化效应,偏振光显微镜中经常遇到的。 使用相同的策略,并保持与彩色滤光片曝光信息的记录。

相位差板使用偏振光或微分干涉对比,也能引起曝光不足的问题,尤其是当光电二极管的灵敏度可能不会是均匀的在整个可见光光谱或检测器是敏感的极化效应。 在这些条件下,曝光时间的确定应通过实验,使用括号,自动相机系统推荐的曝光。 用手动相机拍摄标本时,始终使用括号。

当薄膜是很暗或全黑,有一种可能性,即它没有被暴露。 这可能是表示与电影提前机制自动相机或相机的快门系统故障的一个严重的问题。 如果整卷的未曝光,但相机似乎是正常显微摄影过程中,检查做出一定的摄像头所接收光显微镜。 也可以通过检查卷取轴,以确保其正常工作和电影是否正确连接。 许多自动曝光系统不会允许薄膜被暴露当正在接收光线不足时,但较旧的手动系统没有这个安全功能。 在未曝光胶卷,只有一个或几个帧,检查摄像头,以确保电影推进。



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