尼康显微镜的荧光激发块
在这里我们展示如何激发块选择的平场免疫荧光显微镜可以扩展他们的能力。
平场免疫荧光显微镜是什么
荧光团
荧光现象发生时由一种物质,当它释放能量,当它从兴奋状态返回到其基态时就会发出亮光吸收特定波长的光 (励磁光)。许多荧光物质 (称为荧光团) 已经有不同的用途,与激发波长从紫外到红外。然而,发射波长通常比的长的激发能量,使得它们的波长。
平场免疫荧光显微镜
平场免疫荧光显微镜中的激发块中的作用
励磁激发块 (EX)
二色镜 (DM)
屏障激发块 (BA) 或排放 (EM) 的激发块
尼康的噪音终结者
选择荧光激发块和镜
选择荧光激发块和镜子时,应遵循以下步骤。
(荧光物质) 荧光波长
确定在使用荧光的波长。此信息指出在目录里,但荧光的波长特性也略有改变不同盐度、 ph 值和胞内条件等的可解条件。因此,我们建议用荧光计测量励磁和荧光波长。然后,使用此信息来选择*适当的光学元件。
二色镜的选择
障碍激发块选择
选择一个激发块,允许荧光波长从传递的标本。通常情况下,长时间传输波长长的通激发块都是选择带通激发块。然而,是不会传染这些波长较长的带通激发块是经常用作屏障激发块从一个多重染色标本中分离的波长或使用相机对较长的波长敏感时。
励磁激发块选择
组合的屏障激发块和励磁激发块
障碍激发块和激发块励磁的**结合是一个可以让没有光通结合时。发射的荧光是很弱,所以通过激发块泄漏任何光线会降低图像质量。
获得明亮的荧光图像
有时它被建议删除 ND激发块在励磁光学和增加激发光源的强度。然而,增加激发光源的强度将会快速漂白荧光基团,损害的标本,以及日益增加的自体荧光 (注 2) 的单元格中。基于这些原因,光源应保持尽可能弱和观察光学作出尽可能高效在捡的荧光信号 (通过扩大物镜的孔径,增加波段内荧光滤光片,使用更加灵敏的照相机等)。。
[注 1]斯托克城的转变是指激发能量和荧光能量所产生的能量部分损失作为热作为电子落回从兴奋状态中荧光材料其基态之间的能量差。(从岩波书店书店的物理和化学词典)
[注 2]自体荧光是指在非那些通常被定义为荧光物质的荧光物质的存在。例如,单元组件 (如 NAADPH 或核黄素给掉在短波长范围内 (紫外和可见) 在不染色细胞相对较强的荧光。
还原漂白工艺
你可以采取以下步骤,以减少漂白。
使用抗漂白的代理
P-苯二胺抗漂白剂可以用于 FITC 和 n-丙基 gallete 可以用于罗丹明。
使用 ND 滤镜
使用中性密度或 ND 滤镜上显微镜以减少光的水平到*起码的观察。有时这可能需要设置的筛选到 100%,同时考虑不分割的光路步骤尽可能多。
使用漂白耐荧光
为每个测试的目的使用可用的*耐漂白剂荧光。